La resistencia a los fármacos es aún una necesidad deficiente en el tratamiento del cáncer colorrectal (CCR). Recientemente, la muerte celular regulada dependiente del hierro, la ferroptosis, ha surgido como una posible estrategia terapéutica para superar la resistencia a los fármacos en el CCR. Como los productos naturales se han probado como candidatos prometedores para inducir ferroptosis en el CCR, se investigaron los efectos anticancerígenos del extracto acuoso de Orostachys japonica (OJ) en células de CCR SNU-C5 (SNU-C5/5-FUR) resistentes al 5- fluorouracilo (5-FU) en términos de ferroptosis. Para el análisis se utilizaron la viabilidad celular, la inmunotransferencia y la citometría de flujo. El OJ mostró una CI50 de 280 μg/mL in vitro. El tratamiento a largo plazo con OJ (250 μg/kg) indujo eficazmente la ferroptosis con una disminución de GPX4, receptor de transferrina y ferroportina, y un aumento de HMGB1 en tejidos xenoinjertados con células SNU-C5/5-FUR. El tratamiento a corto plazo con OJ (hasta 250 μg/mL) no mostró una ferroptosis eficaz con un ligero aumento de GPX4, receptor de transferrina y cadena pesada de ferritina. El co-tratamiento con inductores de ferroptosis (RSL3 y sulfasalazina) o inhibidores (mesilato de deferoxamina y ferrostatina-1) no mostró ningún efecto aditivo o sinérgico sobre la viabilidad celular de las células SNU-C5/5-FUR. Cuando se cotrató con mesilato de deferoxamina en dosis altas, el OJ indujo aún más la apoptosis, así como la detención del ciclo celular en la fase G2/M. Los resultados sobre ferroptosis in vitro e in vivo fueron inconsistentes en las células SNU-C5/5-FUR, pero la ferroptosis in vivo indica que otras vías podrían ser viables para inducir ferroptosis o muerte celular aumentada por ferroptosis en los CRC resistentes al 5-FU.