Las células madre espermatogónicas (CME) tienen capacidad de auto renovación y diferenciación esenciales para la producción de esperma a lo largo de la vida reproductiva masculina. El «scaffold» nanofibroso de policaprolactona / gelati- na (PCL / Gel) electrohilado imita características importantes de la matriz extracelular (MEC), que puede proporcionar una técnica prometedora para la proliferación y diferenciación de CME in vitro. El objetivo del presente estudio fue investigar los efectos del «scaffold» nanofibroso PCL / Gel en la propagación y diferencia- ción de CME de ratones neonatos (mSSC). Los mSSC se aislaron enzimáticamente y las células se purificaron mediante un método de siembra diferencial y se sembraron en un «scaffold». Después de 2 semanas, se investigaron la viabilidad, el número y el diáme- tro de las colonias y la expresión de genes específicos de células espermatogónicas. Después de la propagación de mSSC, las célu- las se cultivaron en un medio de diferenciación en el «scaffold» durante otras 2 semanas, y las células se analizaron mediante PCR en tiempo real. El número de colonias mSSC (P <0,01) y los niveles de expresión de los genes espermatogónicos específicos Plzf e Inga6 (P <0,01) y también los genes de diferenciación c-Kit, Tp1 y Ptm1 (P <0,05) fueron mayores en el grupo de «scaffold» en com- paración con el control durante el período de cultivo. Concluimos que los mSSC pueden expandirse y diferenciarse en células espermátidas en un «scaffold» de nanofibras PCL / Gel con parámetros de desarrollo mejorados.